Фуксин основной, водный (фуксин Пфейффера) Карболовый фуксин Циля – 10 мл
Дистиллированнаявода – 90 мл
Водныйфуксин нестоек, его лучше готовитьнепосредственно перед употреблением.Раствор водного фуксина может хранитьсяне более 10 дней.
Карболовый генциановый фиолетовый Генциановый фиолетовый (кристаллы) – 1 г
Этиловыйспирт,96% – 10 мл
Карболоваякислота – 5 г
Дистиллированнаявода – 100 мл
Техникаприготовления карболового генциановогофиолетового такая же, как карболовогофуксина Циля.
Приприготовлении карболового генциановогофиолетового можно также готовитьпредварительно два раствора.
1-йраствор
Генциановыйфиолетовый – 1 г
Этиловыйспирт, 96% – 10 мл
2-йраствор
Карболоваякислота – 5 г
Дистиллированнаявода – 95 мл
Последовательностьи способ приготовления первого и второгорастворов такие же, как и при приготовлениикарболового фуксина Циля.
Приготовление красящих бумажек генцианвиолета (по Синеву)
Дляприготовления бумажек фильтровальнуюбумагу предварительно испытывают напригодность. Для этого полоскуфильтровальной бумаги погружают вспиртовой раствор красителя (карболовогогенцианового фиолетового), высушиваютна воздухе. Хорошая бумага окрашиваетсяравномерно без пятен.
Если небольшойкусок такой бумаги положить на стеклос несколькими каплями воды, он сразу жепропитается водой и краситель черезнесколько секунд перейдет в раствор.Бумагу для пропитывания нарезаютполосками (шириной 2,5-3 см, длиной 30 см)и погружают в краситель так, чтобысмачивались обе поверхности.
Затемполоски вынимают, высушивают на воздухепри комнатной температуре или в термостатепри 37°С.
Пропитыватькрасящиеся бумажки можно также спиртовымраствором генцианвиолета следующегосостава:
Генциановыйфиолетовый (кристаллы) – 1 г
Спиртэтиловый, 96° – 100 мл
Глицерин – 5 мл
Метиленовый синий (насыщенный спиртовой раствор)
3г метиленового синего растворяют в 100мл 96%-ного этанола. Раствор выдерживают2-3 дня, периодически взбалтывая. Затемфильтруют через бумажный фильтр. Растворустойчив.
Растворбриллиантовой зелени (раствор малахитовогозеленого)
Водныйнасыщенный растворготовится путем растворения 10 гмалахитового зеленого в 10 мл дистиллированнойводы. Спиртово-водныйраствор:10 г малахитового зеленого смешиваетсяс 80 мл дистиллированной воды и 20 мл96%-ного этанола.
Метиленовыйсиний 1:40
1мл насыщенного спиртового раствораметиленового синего смешивают с 40 млдистиллированной воды.
Метиленовыйсиний, щелочной раствор (по Леффлеру)
К100 мл дистиллированной воды прибавляют30 мл насыщенного спиртового растворамителенового синего и 1 мл 1%-ного водногораствора гидроксида калия.
Метиленовыйсиний по Финку
Отдельновзвешивают 0,9 г гидрофосфата натрия,13,6 дигидрофосфата калия и 0,1 г метиленовогосинего. Каждую навеску растворяют в 500мл дистиллированной воды. Смешивают0,25 мл первого раствора с 99,75 мл второго и 100 мл третьего (рН 4,6).
Сафранин(водный)
10мл 2,5%-ного раствора сафранина в 96%-номэтаноле смешивается со 100 мл дистиллированнойводы.
РастворЛюголя(вмодификации Грама)
Вступку вместимостью 30-50 мл помещают 1 гкристаллического йода и 2 г йодида калия, растирают смесь пестиком, добавляют 1мл дистиллированной воды, продолжаютрастирать кристаллы и добавляют еще 5мл воды.
При этом йод растворяется вйодиде калия. Раствор количественнопереносят в склянку и доводят общийобъем до 300 мл.
Раствор годен не более30 дней, хранят его в прохладном месте,в темноте, лучше в посуде оранжевогоцвета.
РастворЛюголя для выявления гликогена игранулезы
Кристаллическиййод – 1 г
Йодидкалия – 3 г
Водадистиллированная – 300 мл
Растворготовят так же, как и предыдущий.
Дляобнаружения гликогена можно такжеиспользовать крепкий раствор йода
Кристаллическиййод – 7 г
Йодидкалия – 20 г
Водадистиллированная – 100 мл
КраскаМуромцева
Готовятдва раствора:
1-йраствор
Фуксиносновной – 0,15 г
Спирт,96% – 20 мл
Кристаллическаякарболовая кислота – 10 г
2-йраствор
Метиленовыйсиний – 2,5 г
Дистиллированнаявода – 200 мл
Обараствора смешивают и фильтруют черезбумажный фильтр.
Раствортуши для выявления капсул
Смешивают10 мл жидкой натуральной туши с 90 млдистиллированной воды. Затем растворцентрифугируют 15-20 мин. Верхний слойпереносят в пробирку и автоклавируют30 мин (0,05 МПа, температура 110 0С).После автоклавирования раствор отстаиваютдве недели, после чего его можноиспользовать.
2. ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ
УНИВЕРСАЛЬНЫЕПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ
Мясопептонныйбульон.Приготавливают мясную воду: 1 кг говяжьегомяса, освобожденного от костей, жира,сухожилий, пропускают через мясорубку,заливают 2 л водопроводной воды. Фаршнастаивают в воде 12…24 часа на холоде.
За это время из мяса экстрагируютсяводорастворимые белки, аминокислоты,витамины, углеводы, минеральные и другиевещества. Настой фильтруют через двойнойслой марли, мясо хорошо отжимают ифильтрат кипятят 30 мин для свертываниябелков.
Сняв жир, остывшую жидкостьпропускают через ватно-марлевый фильтри доливают водой до первоначальногообъема. Мясную воду разливают по колбамили бутылкам и стерилизуют в автоклавепри 0,1 МПа в течение 20 мин.
Дляприготовления мясопептонного бульонак мясной воде добавляют 1% пептона и 0,5%химически чистого хлорида натрия,кипятят 10 мин, фильтруют через складчатыйбумажный фильтр, устанавливают рН7,2…7,4 10% раствором двууглекислой содыи снова кипятят 10 мин. Мясопептонныйбульон должен иметь соломенный цвет ибыть совершенно прозрачным. Его разливаютв пробирки, колбы, закрывают ватно-марлевымипробками и стерилизуют при давлении0,1 МПа 20-30 мин.
Питательныйбульон можно приготовить из заменителеймяса (мясного экстракта, рыбногогидролизата) по способу, указанному наэтикетке.
Мясопептонныйагар готовитсяиз мясопептонного бульона с добавлением2…3% измельченного или порошкообразногоагар-агара. Раствор нагревают до кипенияи кипятят до полного растворения агара.
Затем раствор охлаждают до 50 0Си осветляют взбитым куриным белком (1белок на 1 л среды), смешанным с 30 мл воды,вновь доводят до кипения и кипятят 20мин. Белок свертывается, оседает иосветляет среду.
Горячий агар фильтруютчерез ватно-марлевый слой, доводят дорН 7,2…7,4, разливают по пробиркам иликолбам и стерилизуют 20 мин при давлении0,1 МПа.
Пептоннаявода.Растворяют 30 г пептона в 1 л дистиллированнойводы и стерилизуют 20 мин при давлении0,1МПа.
Пептоннуюводу можно также приготовить следующимобразом: к 1 л дистиллированной водыдобавляют при нагревании 10 г пептона,5 г хлорида натрия и 0,1 г нитрата калия.Фильтруют через бумажный фильтр иустанавливают рН 7,6…7,8. Разливают попробиркам и стерилизуют текучим паромдробно по 30 мин в течение 3 сут.
Солодовоесусло.250…300 г ячменного сухого солода крупногопомола заливают 1 л водопроводной воды,нагревают до 48-50 0Си, непрерывно помешивая во избежаниеобразования комочков, поддерживаюттемпературу в течение 30 мин.
Затемтемпературу повышают до 55…58 0С,через 30 мин до 63 0Си на этом уровне выдерживают смесь дополного осахаривания крахмала. Готовуюсреду отжимают через полотняный фильтр,чтобы удалить дробину, затем фильтруютчерез складчатый бумажный фильтр.
Вфильтрате определяют концентрациюсухих веществ (СВ) при 20 0С,которая обычно составляет 18-20%. До нужнойконцентрации фильтрат разводятводопроводной водой. Для выращиваниядрожжей солодовое сусло должно иметьконцентрацию 6…8% СВ, для молочнокислыхбактерий – 8…12% СВ, для мицелиальныхгрибов 3…4%, рН среды 5,6…6,0.
При болеенизком значении рН сусло подщелачивают10% раствором двууглекислой соды илигидроксида натрия. Далее сусло разливаютв колбы или пробирки, закрывают ихватно-марлевыми пробками и стерилизуютпри давлении 0,05 МПа 30 мин.
Дляприготовления данной среды можно такжеиспользовать неохмеленное заводскоепивное сусло, доведенное до определенногосодержания СВ и рН.
Сусло-агар.При приготовлении сусло-агара к солодовомусуслу добавляют 2% агара. Для микроорганизмов,образующих кислоты добавляют такженемного мела. Среду стерилизуют 30 минпри давлении 0,05 МПа или дробно текучимпаром.
Средаиспользуется для выделения, выращиванияи хранения дрожжей, мицелиальных грибов,молочнокислых и уксуснокислых бактерий.
Дрожжевойавтолизат.Способ1:гомогенную массу из 1 кг прессованныххлебопекарных дрожжей и 1 л водопроводнойкипяченой воды ставят в термостат при50 0С,добавив несколько капель толуола, ивыдерживают при периодическомперемешивании 72 ч. По окончании автолизадрожжей массу нагревают в автоклавепри 0,02 МПа 30 мин.
Остывшую массу фильтруютчерез двойной складчатый бумажныйфильтр до полной прозрачности. Прозрачныйфильтрат содержит 0,9% азота. Фильтратнейтрализуют до рН 6,8…7,0, разливают впробирки или колбы и стерилизуют придавлении 0.01…0,05 МПа в течение 10…20 мин.Способ2:1 кг прессованных дрожжей смешивают с4 л водопроводной воды и выдерживают втермостате при 55 0Св течение 24 час.
Затем автолизат фильтруюти стерилизуют при давлении 0,05 МПа 20 мин.
Источник: https://StudFiles.net/preview/5283743/page:5/
