Глюкозооксидазный метод

Содержание
  1. Методы определения глюкозы в крови
  2. Методы
  3. Глюкозооксидазный метод
  4. Гексокиназный метод
  5. Портативные измерители
  6. Наиболее популярные фотометрические глюкометры
  7. Электрохимические глюкометры
  8. Спектрометрические глюкометры
  9. Как провести тест?
  10. Профилактические меры
  11. Глюкоза
  12. Принцип
  13. Нормальные величины
  14. Определение содержания глюкозы глюкозооксидазным методом по набору “Новоглюк”
  15. Принцип
  16. Нормальные величины
  17. Влияющие факторы
  18. Кровь
  19. Моча
  20. Спинномозговая жидкость
  21. Инструкция по применению набора реагентов для количественного определения содержания глюкозы в сыворотке и плазме крови человека глюкозооксидазным методом «глюкоза uts»
  22. 1.НАЗНАЧЕНИЕ
  23. 2.ПРИНЦИП МЕТОДА
  24. 3.СОСТАВ НАБОРА
  25. 4.АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕХАРАКТЕРИСТИКИ
  26. 5. МЕРЫПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
  27. 6.ОБОРУДОВАНИЕ И РЕАГЕНТЫ
  28. 7.АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ
  29. 8.ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА
  30. 9.УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ЭКСПЛУАТАЦИИ НАБОРА
  31. Глюкозооксидазный и гексокиназный методы определения глюкозы в сыворотке в крови
  32. Методики определение глюкозы в крови
  33. Глюкозооксидазный метод
  34. Гексокиназный способ
  35. Подготовка к анализу
  36. Нормы глюкозы в сыворотке крови по возрастам
  37. О чем говорит повышение/понижение показателя
  38. по теме
  39. Глюкозооксидазный способ определения глюкозы
  40. Когда назначается проведение глюкозооксидазного метода?
  41. Что в основе этого способа?
  42. Суть глюкозооксидазного метода определения глюкозы
  43. Как проводится анализ?
  44. Реактивы для исследования
  45. Нормы при проведении анализа

Методы определения глюкозы в крови

Глюкозооксидазный метод

Основным показателем углеводного обмена является глюкоза. Измерение сахара в крови помогает в определении различных заболеваний, в частности таких как сахарный диабет и всевозможные болезни крови. Чтобы предотвратить многие недуги врачи рекомендуют держать уровень глюкозы в пределах нормы.

Методы

Есть несколько методов, которые могут быстро измерить уровень сахара в крови. Наиболее популярными считаются:

  • Ферментативный;
  • Гексокиназный метод.

Раньше использовались также редуктометрический и колорометрический, но из-за токсичности и низкой точности они больше не используются в современной медицине.

Ферментивный метод определения глюкозы в крови условно делится на:

  • глюкозооксидазный
  • гексокиназный

Глюкозооксидазный метод

Определение глюкозы в крови глюкозооксидазным методом используется еще с начала века.Он популярен тем, что использует ферменты для получения результата. То есть, основывается на реакции окисления глюкозы в крови или моче. А также по результатам с использованием плазмы крови.

Простота метода заключается также в том, что результат очень быстро можно получить при помощи биохимического фотометра, так и автоматическим анализатором.Такой метод специалисты считают наиболее точным, а для анализа необходима кровь или сыворотка крови.

У него также есть некоторые недостатки: во время анализа, перекись водорода, которая образуется от синтеза, может значительно занижать результаты глюкозы.

Поэтому такой метод считают линейным, с ошибкой в 30ммоль/л.

Гексокиназный метод

Такой метод считают референтным по измерению уровня глюкозы в крови, но наиболее точным, так как не взаимодействует с компонентами сыворотки крови. Чаще всего этот метод используют в эндокринологических отделениях.
Сотрудники лаборатории могут предложить способы проведения такого анализа:

  • провести обследование при помощи автоматического биохимического анализатора;
  • автоматический фотометр, который используют в небольших лабораториях;
  • в экстренных ситуациях удобным будет карманный глюкометр (One Touch).

Достаточно быстро можно определить уровень глюкозы в крови каждого человека.

При помощи портативных глюкометров и быстрым биохимическим анализом в лаборатории.

Проводить анализ крови можно в лаборатории или в домашних условиях. Почти все методы лабораторных анализов предполагают забор крови из вены или пальца. И хоть данный анализ не требует специальной подготовки. Есть факторы, которые могут повлиять на результаты:

  • Сильная физическая нагрузка накануне сдачи анализа.
  • Сильное эмоциональное потрясение.
  • Переедание или чрезмерное употребление алкогольных напитков.
  • Также стоит помнить о том, что не следует перед анализом крови 2-3 дня использовать лекарственные препараты.

Если кровь для анализа берут из вены, делать это нужно утром, натощак.

Если же для анализа используют кровь из пальца, ее забор можно совершать в любое время суток.
На качество лабораторного исследования могут влиять такие факторы:

  • время забора крови;
  • материал пробирок или качество системы для забора крови;
  • положение тела пациента;
  • квалификация медицинских сотрудников.

Читайте так же:  Узнаем все про гликемический профиль

Хранение и транспортировка образца очень важна для правильного результата. Для этого используют специальные системы вакуумного хранения, которые надежно защищают образец от внешних факторов.

Такие контейнеры защищают от солнца и света, образцы крови в них могут храниться до 2 суток.

Портативные измерители

Фотометрические глюкометры, как анализатор глюкозы, может использовать для анализа только капиллярную кровь. Это значит, что анализ можно делать в домашних условиях, используя кровь из пальца или пятки.

Посмотрите видео на эту тему

Наиболее популярные фотометрические глюкометры

Данные приборы показывают результат, который снован на изменении окраса крови, что является реакцией глюкозы и нанесенных на тест-полоску веществ.

Фотометрические глюкометры оценивают характер окрашивания, и трансформирует его в цифры.
Глюкохром МАнализ таким устройством можно провести за 2 минуты. Благодаря специальному полю, полоски хорошо считываются, а результат отображается на экране. В комплекте идут полоски, которые предназначены на 15 использований.

Стоимость данного глюкометра низкая, в некоторых городах их выдают бесплатно для людей с сахарным диабетом.

Глюкометр Уан Тач ПроПрибор, который может запоминать различные значения, при заборе крови утром, днем и ночью. Прибор также показывает среднее значение за последние несколько недель. В этом приборе также главным преимуществом есть передача данных на компьютер.

Цена на данный прибор начинается от 1500 тыс. рублей.

Глюкометр Акку-Чек АктивФотометрический измеритель, который пользуется популярностью , так как может измерять уровень глюкозы по анализу, взятому из предплечья, ладони, бедра. Производители гарантируют высокое качество товара. Также на устройстве можно установить дату и время проведения анализа, это позволяет следить за изменением показателей.

Стоимость данной модели глюкометра около 800 рублей.

Акку-Чек ГоуИзмерения можно делать в диапазоне 0,6- 30ммоль/л. Аппарат на батарейках со сменными полосками. Можно проводить забор крови из альтернативных мест (плече, рука). Результаты анализов сохраняются автоматически, их также можно переносить в компьютер. Память устройства способна сохранить результаты за весь год, что очень удобно для просмотра возможных изменений.

Стоимость такого глюкометра от 1200 рублей. При этом недостатком можно назвать высокую стоимость сменных полосок.

ГлюкейерДиапазон измерения данным глюкометром составляет от 2,2 – 20ммоль/л. Результат анализа можно узнать за 1 минуту, при этом нужно соблюдать температурные условия. Такой глюкометр нужно держать в сухом месте, защищенном от влажности и солнца. У данного устройства не слишком большая популярность, так как множество факторов могут влиять на показатели: употребление витамина С, обезвоживание, а также заболевания почек. Также сами полоски требуют специального места для хранения.

Стоимость около 600 рублей, в наборе есть полоски, которые можно использовать в течении месяца.

Электрохимические глюкометры

Глюкометры данного вида самые удобные и качественные. Электрохимический глюкометр показывает уровень сахара по электрическому току, который появляется в результате взаимодействия крови с глюкозой.

Это наиболее точные устройства.
Элта-СателлитДиапазон измерения от 1,8- 35 ммоль/л. Результат анализа появляется на экране в течении 40 секунд. Такой аппарат имеет множество преимуществ, например: быстрый результат, нет необходимости промокать тест полоску, кровь наносится вне прибора, низкая стоимость.

Такой аппарат для измерения стоит около 500 рублей.

Уан Тач УльтраИзмерения от 1,1- до 30 ммоль/л. Анализ проводится при помощи биосенсора. Результаты анализа можно посмотреть за 4-5 секунд, при этом крови нужно 1мкл. А сама тест полоска укажет на то, что крови достаточно. Все данные можно перенести на ПК, и показать врачу. Тест-полоски, которые в комплекте, нужно использовать на протяжении 3 месяцев и сохранять в специальном контейнере.

Стоимость комплекта около 2000 рублей.

СмартскенИзмерения от 1,1-до 33 ммоль/л. Такой глюкометр способен проводить анализ на протяжении 10 секунд, полоски при этом защищены. Результаты сохраняются в памяти. Можно данные переносить в ПК. Прибор надежно защищен от попадания в него крови. Наличие тестовой полоски для определения глюкозы (10штук).

И хотя сам прибор можно купить за 800 рублей, полоски для анализа стоят дорого.

Асцензия ЭлитУдобен тем, что есть встроенные тест-полоски, а также прибор абсолютно без кнопок и очень прост в использовании. Это одновременно плюс и минус, устройство нельзя подключить к компьютеру.

В комплекте с устройством только 5 тестовых полосок, после – нужно покупать новые. Стоимость такого прибора около 1000 рублей.

Асцензия Энтраст глюкометрИзмерения от 1,7- до 25 ммоль/л. Специальная сенсорная технология измерения гликемии. В наборе есть специальный прибор для прокалывания пальца и несколько тестовых полосок. Прибор достаточно большой и его удобно держать в руке. Есть автоматическое включение и выключение.

Стоимость прибора около 800 рублей, дополнительные полоски от 15 руб./шт.

Спектрометрические глюкометры

Данные устройства не предполагают контакта аппарата с кровью.

Спектрометрические глюкометры сканируют ладонь человека лазером и считывают особые биохимические процессы.

Мобайл аку-чек
Специальная лента из 50 полосок, которые могут сохранять информацию. Без проколов. Стоимость от 3500тыс. рублей. Дополнительные полоски нужно покупать и хранить в контейнере.

Сателлит
Прибор, который не нуждается в замене полосок. Стоимость от 2000 руб. Такой прибор часто ставят в аптеках для общего пользования.

Ван Тач
Способен сохранять и кодировать результат с полосок, а также переносить информацию на ПК. В наборе есть 50 тестовых полосок. Стоимость от 1200 рублей.

Libre
Без прокола пальца, устройство может контролировать уровень глюкозы в крови. Сохраняет информацию около 8 часов, и способен показывать информацию и результаты каждую минуту. Стоимость 1500 рублей.

Дексом
Аппарат, который без использования прокола, покажет уровень глюкозы. Способен сохранять и переносить данные на ПК, результат показывает на протяжении 1 минуты. Специальные сменные полоски идут в комплекте по 50штук. Стоимость аппарата около 1000 рублей.

Другие измерители:

  1. лазерный глюкометр,
  2. сенсорный,
  3. глюкометр с управлением голосом,
  4. глюкометр Романовского, который просто подносится к коже человека.

Читайте так же:  Узнаем, как сдавать кровь на сахар

Как провести тест?

Чтобы аппарат выдавал стабильный, точный результат следует:

  • Хранить аппарат в хороших условиях, без сильных перепадов температур и высокой влажности.
  • Полоски для теста должны сохраняться в защитном контейнере.

Перед проведением теста нужно:

  • Тщательно вымыть руки, а место прокола продезинфицировать спиртовой салфеткой.
  • После прокола кожу нужно обработать антисептиком.
  • Проводить забор крови для теста лучше в ванной комнате.
  • Игла должна быть простерилизована.
  • Глубину и место прокола должен определить лечащий врач.

Кровь на полоске должна аккуратно прислоняться к глюкометру, внимательно следовать инструкции в зависимости от типа аппарата.
Проводить забор крови нужно не более 4 раз в сутки.

Вначале использования приборов нужно сравнивать результаты с лабораторными.

Нормальными показателями для людей от 14 до 60 лет есть от 3 до 5 ммоль/л.

  • Для новорожденных до 1 месяца – от 2,8 — до 4 ммоль/л.
  • Детям до 14 лет – 3,5-5,5.
  • От 14 до 60 – 3-5,5.
  • От 60 до 90лет — 4,5 – 6,5 ммоль/л.
  • Старше 90 лет – до 6,7 ммоль/л.

Для женщин и мужчин показатель одинаковый.

У женщин он может повышаться только в гестационном периоде. У беременных норма 5- 6,5 ммоль/л.
Повышенные значения:

  • сахарный диабет;
  • дефицит железа;
  • повышение может быть из-за фетального гемоглобина.

Сниженные значения:

  • анемия;
  • кровотечения;
  • гипогликемия;
  • дальнейшее переливание крови.

Профилактические меры

При незначительных изменениях нормы глюкозы нужно как можно раньше наладить режим питания. Для больных гипергликемией нужно исключить использование углеводов.
Для тех, кто страдает диабетом, и хочет держать уровень глюкозы в норме, нужно использовать диету№9.

Если уровень глюкозы превышен из-за других возможных заболеваний, их нужно немедленно устранять.
В каждом отдельном случае нужно всегда консультироваться с врачом и следовать рекомендациям.

Если возникла необходимость в частом измерении уровня глюкозы, нужно очень тщательно подходить к тому, как правильно выбрать измеритель крови.

Практически все аппараты имеют сертификаты качества, а результаты точные как в лаборатории. Придерживаясь инструкций врача и фармацевта, можно следить за уровнем глюкозы в домашних условиях, без ежедневного посещения больницы.

Держать уровень сахара в норме очень важно, ведь увеличение или снижение может влиять на работу всего организма и провоцировать различные заболевания. Кроме этого, людям которые болеют сахарным диабетом, нужно чаще посещать врача для обследования.

Читайте так же:  Все про глюкозотолерантный тест

Источник: http://1pokrovi.ru/analizy-krovi/bioximicheskij/na-saxar/opredeleniya-glyukozy-v-krovi.html

Глюкоза

Глюкозооксидазный метод

Наиболее распространенный углевод в животном организме — глюкоза. Она играет роль связующего звена между энергетическими и пластическими функциями углеводов, поскольку из глюкозы могут образовываться все другие моносахариды, и наоборот — различные моносахариды могут превращаться в глюкозу.

Более 90% всех растворимых низкомолекулярных углеводов крови приходится на глюкозу; кроме того, в небольших количествах могут присутствовать фруктоза, мальтоза, манноза и пентозы, а при патологии и галактоза. Наряду с ними в крови содержатся связанные с белками полисахариды.

Особенно интенсивно глюкозу потребляют и используют для разнообразных нужд ткани центральной нервной системы, эритроциты, мозговое вещество почек.

В промежуточном обмене глюкоза используется для образования гликогена, глицерина и жирных кислот, аминокислот, глюкуроновой кислоты и гликопротеинов.

Концентрация глюкозы в крови является производной процессов гликолиза и окисления трикарбоновых кислот в ЦТК, гликогенеза и гликогенолиза в печени и мышечной ткани, глюконеогенеза в печени и почках, поступления глюкозы из кишечника.

В клинической практике обычно исследуют содержание глюкозы в крови, к определению концентрации других сахаров и гликогена прибегают значительно реже.

В крови человека глюкоза довольно равномерно распределена между плазмой и форменными элементами, установлено, что в венозной крови содержание сахара на 0,25‑1,0 ммоль/л (в среднем на 10%) меньше, чем в артериальной и капиллярной.

Известную диагностическую ценность представляет определение молочной и пировиноградной кислот, активности ряда ферментов углеводного обмена, сиаловых и гексуроновых кислот, серомукоидов, гликозилированного гемоглобина и других показателей.

глюкозы в моче зависит от ее концентрации в крови, хотя выделяется она как при нормальном, так и при повышенном уровне сахара крови.

При повышении концентрации глюкозы в крови преодолевается так называемый почечный порог (у здоровых людей лежит в области 8,3‑9,9 ммоль/л) и наступает глюкозурия.

При артериосклеротической почке, при диабете порог повышается и может не отмечаться глюкозурия даже при повышении концентрации глюкозы до 11,0‑12,1 ммоль/л.

Методы определения глюкозы в крови подразделяют на три группы: редуктометрические, колориметрические и энзиматические.

1. Редуктометрические методы:

  • титрометрический способ Хагедорна‑Йенсена основан на свойстве сахара восстанавливать при кипячении в щелочной среде железистосинеродистую и железосинеродистую соли калия. По степени этого восстановления титрометрически исследуют концентрацию сахара в крови. Важным преимуществом метода является дешевизна и возможность использования в любой лаборатории;
  • основанные на восстановлении нитробензолов, например, пикриновой кислоты в пикраминовую;
  • метод, основанный на способности глюкозы восстанавливать соли меди. Образующаяся одновалентная медь выступает в качестве промежуточного вещества. Окисляясь кислородом воздуха, она восстанавливает мышьяковомолибденовую или фосфорновольфрамовую кислоту, которые служат окончательным хромогеном.

Однако следует иметь в виду, что методы этой группы дают завышенные результаты (примерно на 20‑25%), так как в крови присутствует ряд соединений, не относящихся к углеводам, но обладающих восстановительными свойствами (мочевая кислота, глутатион, креатинин, аскорбиновая кислота);

2. Колориметрические методы. К ним относятся:

  • метод Сомоджи — реакция восстановления меди, находящейся в составе меднотартронового реактива, до закиси меди. Метод трудоемок, многостадиен, неспецифичен и в настоящее время практически не используется;
  • метод Фолина‑Ву — реакция восстановления тартрата меди в закись. Метод прост, недостатком является отсутствие строгой пропорциональности между интенсивностью получаемой окраски и концентрацией глюкозы;
  • определение концентрации глюкозы по Моррису и Роэ — дегидратация глюкозы под действием серной кислоты и превращение ее в оксиметилфурфурол, который конденсируется с артроном в соединение синего цвета. Требует чистейших реактивов и четкого соблюдения постояной температуры реакции;
  • ортотолуидиновый метод Гультмана в модификации Хиваринена-Никкила, состоящий в определении интенсивности окрашивания раствора, возникающего при взаимодействии ароматического амина ортотолуидина с альдегидной группой глюкозы в кислой среде. Этот способ точен и дает возможность более специфичного определения содержания глюкозы.
  • анилиновый метод, сохраняет чувствительность ортотолуидинового метода, но еще более специфичен.

3. Ферментативные методы:

  • основанный на гексокиназной реакции. Глюкоза под действием гексокиназы фосфорилируется за счет АТФ, образовавшийся Гл‑6‑Ф в присутствии дегидрогеназы восстанавливает НАДФ. Количество последнего определяют по увеличению светопоглощения в ультрафиолетовой области. Метод слишком дорогостоящий для практических лабораторий.
  • основанные на окислении глюкозы до глюкуроновой кислоты с помощью фермента глюкозооксидазы и образовании в ходе реакции перекиси водорода, которая (в разных модификациях):
◊ определяется химическим путем;
◊ при участии пероксидазы окисляет бесцветный ортотолидин, превращая его в окрашенное соединение зелено‑голубого цвета, прямолинейность зависимости окраски от концентрации глюкозы сохраняется в диапазоне от 1,1 до 22 ммоль/л;
◊ в присутствии фенола при участии пероксидазы окисляет 4‑амино­антипирин в окрашенное соединение розово-малинового цвета;
◊ в присутствии ионов меди окисляет фенолфталин до фенолфталеина, который в щелочной среде окрашен в красный цвет.

4. Электрохимические методы, в которых используются электроды, содержащие иммобилизованные ферменты, в частности, глюкозооксидазу. Реакция регистрируется по количеству образованной перекиси водорода или по убыли кислорода, израсходованного на окисление глюкозы.

5. Диагностические полоски, использующие глюкозооксидазно‑пероксидазную реакцию и производные бензидина в качестве хромогена.

В качестве унифицированных принято три метода: титрометрический метод Хаггедорна-Йенсена, ортотолуидиновый метод и глюкозооксидазный метод с окислением о‑толидина.

Принцип

Глюкоза при нагревании с ортотолудином в присутствии серной кислоты дает сине-зеленое окрашивание.

Нормальные величины

Цельная кровь (указанный метод) 3,9‑5,5 ммоль/л
Плазма (тот же) 3,9‑5,5 ммоль/л
Моча (тот же) 0,06‑0,83 ммоль/л
или < 2,78 ммоль/сут

Определение содержания глюкозы глюкозооксидазным
методом по набору “Новоглюк”

Глюкозооксидазным методом можно определять количество глюкозы в сыворотке и плазме крови, цельной крови и спинномозговой жидкости.

Принцип

При окислении глюкозы кислородом воздуха при каталитическом действии глюкозооксидазы образуется эквимолярное количество перекиси водорода. Под действием пероксидазы перекись водорода окисляет 4‑аминоантипирин в присутствии фенола в окрашенное соединение розово‑малинового цвета, определяемое фотометрически.

Нормальные величины

Цельная кровь (ферментный с фенолом и аминоантипирином)
новорожденные 2,22‑4,44 ммоль/л
дети 3,33‑5,55 ммоль/л
взрослые 3,9‑5,5 ммоль/л
Сыворотка (тот же) 4,2‑6,6 ммоль/л
Цельная кровь (ферментный с ортотолидином) 3,1‑5,5 ммоль/л
Сыворотка и плазма (тот же) 3,0‑5,5 ммоль/л
Ликвор (тот же) дети 3,33‑4,44 ммоль/л
взрослые 2,75‑3,85 ммоль/л

Влияющие факторы

Завышенные результаты уровня глюкозы в крови наблюдаются после приема пищи, при применении кофеина, препаратов гормонов надпочечников, тироксина, пероральных контрацептивов, витамина РР (в больших дозах), диуретиков, при физических упражнениях, эмоциональном возбуждении и других стрессовых воздействиях. Влияние in vitro оказывают галактоза и другие моносахара сыворотки крови, аскорбиновая кислота, леводопа, метилдофа, парааминосалициловая кислота и другие.

Снижение концентрации отмечается после применения анаболических стероидов, антигистаминных препаратов, токсичных доз ацетилсалициловой кислоты, этанола. На результаты анализа влияет наличие гемолиза (выход глутатиона из эритроцитов), высокое содержание аскорбиновой и ацетилсалициловой кислоты в крови.

Кровь

Повышение концентрации глюкозы в крови (гипергликемия) отмечается при:

  • повышении гормональной деятельности гипофиза, надпочечников, щитовидной железы: феохромоцитома, тиреотоксикоз, акромегалия, синдром Кушинга;
  • заболеваниях поджелудочной железы: сахарный диабет (взрослый и юношеский), диабет беременных, острый и хронический панкреатиты, муковисцидоз, опухоли, гемохроматоз. Выраженная гипергликемия без кетоза встречаются у больных сахарным диабетом средней тяжести (или у лиц не страдающих им, с высоким уровнем эндогенного инсулина, предотвращающего развитие кетоза). глюкозы в крови может превышать 50 ммоль/л, в отличие от диабетического кетоацидоза, при котором уровень глюкозы вкрови часто ниже 33 ммоль/л;
  • хронических заболеваниях печени и почек;
  • раздражении ЦНС: кровоизлияния в мозг, травмы, опухоли, отравления окисью углерода, эфиром, синильной кислотой и т.п., менингит, эпилепсия;
  • остром инфаркте миокарда, тяжелой стенокардии, авитаминозе В1, при ожогах (первые сутки).

Гипогликемия встречается при:

  • заболеваниях поджелудочной железы: опухоль панкреатических островков, дефицит глюкагона;
  • тяжелых повреждениях печени: отравления мышьяком, хлороформом, алкоголем, салицилатами, антигистаминными препаратами, фосфором, тетрахлоридом углерода, бензолом, парацетамолом и т.п.;
  • заболеваниях печени, сопровождающихся нарушением гликогенообразования и глюконеогенеза;
  • эндокринных нарушениях: гипопитуитаризм, аддисонова болезнь, гипотиреоз;
  • заболеваниях почек с нарушением реабсорбции, заболевания кишечника с нарушением всасывания, большая потеря крови, несбалансированная диета и недоедание, спленомегалии у детей;
  • передозировке инсулина или пероральных противодиабетических препаратов.

Моча

Выведение глюкозы возрастает при всех случаях гипергликемии свыше 10 ммоль/л (почеч­ного порога). В этом случае глюкозурии могут быть физиологическими и патологическими:

  • к физиологическим относятся алиментарная глюкозурия, глюкозурия беременных и нейрогенная глюкозурия на почве стрессовых состояний,
  • патологическая глюкозурия обнаруживается при сахарном диабете, тиреотоксикозе, акромегалии, гиперплазии коры надпочечников, инфаркте миокарда, кровоизлияниях во внутренние органы, отравлениях морфином, фосфором, при острых инфекциях и нервных заболеваниях.

При нормогликемии глюкозурия может выявляться при повреждениях почечных канальцев — пиело- и гломерулонефриты, токсические поражения, почечный диабет (семейная почечная глюкозурия), нефропатии.

Снижение глюкозы в моче (вплоть до исчезновения) является признаком бактериурии.

Спинномозговая жидкость

Уровень глюкозы повышен при сахарном диабете, эпидемическом энцефалите, сифилисе ЦНС, гипергликемиях различной этиологии.

Уменьшение концентрации глюкозы определяется при остром пиогенном менингите, туберкулезном и криптококковом менингите, менингоэнцефалите, опухолях мягкой мозговой оболочки, саркоидозе.

Вы можете спросить или оставить свое мнение.

  • ВКонтакте

Download SocComments v1.3

Источник: http://biokhimija.ru/uglevody-krovi/glucoz-krovi

Инструкция по применению набора реагентов для количественного определения содержания глюкозы в сыворотке и плазме крови человека глюкозооксидазным методом «глюкоза uts»

Глюкозооксидазный метод

Сохрани ссылку в одной из сетей:

ИНСТРУКЦИЯ

поприменению набора реагентов дляколичественного определения содержанияглюкозы
в сыворотке и плазме кровичеловека глюкозооксидазным методом

«ГЛЮКОЗА- UTS»

Набор«ГЛЮКОЗА – UTS»разрешен кпроизводству, продаже и применению натерритории РФ.

Регистрационноеудостоверение № ФСР 2009/05457

Информация длязаказа набора «ГЛЮКОЗА – UTS»

Кат. № Комплектация Количество определений
ГЛ-09-004-100 реагент 100 мл + калибратор 1 мл 100/v
ГЛ-09-004-400 реагент 400 мл + калибратор 4 мл 400/v

гдеv– объем фотометрической ячейкианализатора.

1.НАЗНАЧЕНИЕ

1.1.Набор реагентов «ГЛЮКОЗА- UTS» предназначендля определения концентрации глюкозыв сыворотке и плазме крови человека вклинико-диагностических и биохимическихлабораториях для целей диагностикизаболеваний и контроля проводимоголечения пациентов.

1.2.Глюкоза является одним из важнейшихкомпонентов крови, ее количество отражаетсостояние углеводного обмена. глюкозы в крови повышается присахарном диабете, эпидемическомэнцефалите, повышении гормональнойактивности щитовидной железы и т.д. Наэтом основано клиническое значениеанализа.

1.3.Потенциальный риск применения набора– класс 2а.

Основной риск косвенный исвязан с возможностью получения неверногорезультата анализа, что может привестик неправильно поставленному диагнозуи назначению неэффективного леченияпациента.

Для снижения указанного рисканеобходимо в каждой аналитической серииконтролировать качество результатованализов с применением контрольныхсывороток в соответствии с ОСТ91500.13.0001-2003.

2.ПРИНЦИП МЕТОДА

2.1. Глюкозооксидазакатализирует окисление β-D-глюкозы собразованием эквимолярных количествглюконовой кислоты и перекиси водорода(1).

Перекись водорода под действиемпероксидазы в реакции с 4-аминоантипирини фенолом образует окрашенный продукт– хинонимин (2), интенсивность окраскикоторого пропорциональна концентрацииглюкозы в анализируемом образце иизмеряется фотометрически при длиневолны 505 (490-550) нм [1,2].

β-D-Глюкоза+ H2O+ O2 Глюкозооксидаза Глюконовая кислота + Н2О2(1)

2Н2О2+ 4-аминоантипирин + Фенол ПероксидазаХинонимин+ 4Н2О (2)

2.2.Фотометрическое измерение основано наналичии пика поглощения с максимумомпри длине волны 505 нм молекуламихинонимина. Все остальные компонентыреакционной смеси слабо поглощают светпри этой длине волны. Таким образом,увеличение оптической плотностиреакционной смеси пропорциональноинтенсивности окраски хинонимина и,следовательно, прямо пропорциональноконцентрации глюкозыв пробе.

3.СОСТАВ НАБОРА

3.1.Набор реагентов «ГЛЮКОЗА- UTS» поставляетсяв виде двух растворов: Реагента икалибратора.

Компоненты и ихсостав:

Наименование Состав Концентрация
Реагент Фосфатный буфер, pH 7,5ФенолГлюкозооксидазаПероксидаза4-аминоантипирин 100 ммоль/л5 ммоль/л>10 000 MЕ/л>2 000 MЕ/л0,5 ммоль/л
Калибратор Водный раствор глюкозы 5,55 ммоль/л

4.АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕХАРАКТЕРИСТИКИ

4.1.Набор обеспечивает линейную областьопределения концентрации глюкозыв диапазоне от 0,5 до 25 ммоль/л, отклонениеот линейности не превышает 2,5%.

4.2. Чувствительность– не более 0,5 ммоль/л

4.3. Воспроизводимость- коэффициент вариации результатовопределений – не более 2,5%.

4.4.Качество набора можно оценивать поотечественным или зарубежным контрольнымсывороткам, аттестованным глюкозооксидазнымметодом.

4.5.Для калибровки автоматизированныхфотометрических систем рекомендуетсяиспользовать сывороточные калибраторы,аттестованные по концентрации глюкозыглюкозооксидазным методом.

4.6.Нормальные величины концентрацииглюкозыв сыворотке или плазме взрослого человекасоставляют 4,1-5,9 ммоль/л [3].

4.7.Перечень лекарственных препаратов,влияющих на определение концентрацииглюкозы,приведены в обзоре [4].

5. МЕРЫПРЕДОСТОРОЖНОСТИ

5.1.Реагентсодержит фенол и 4-аминоантипирин.Следует избегать попадания этих реагентовна кожу и слизистые. В случае попаданияих на кожу и слизистые оболочки необходимопромыть поражённые участки большимколичеством проточной воды.

5.2.  Привыполнении лабораторного исследованиянеобходимо соблюдать «Правила устройства,техники безопасности, производственнойсанитарии, противоэпидемического режимаи личной гигиены при работе в лабораториях(отделениях, отделах) санитарно-эпидемиологическихучреждений системы Министерстваздравоохранения СССР» (Москва, 1981 г.).

5.3.При работе с биологическими пробамиследует надевать одноразовые резиновыеили пластиковые перчатки, т.к. образцыкрови человека следует рассматриватькак потенциально инфицированные,способные длительное время сохранятьи передавать ВИЧ, вирусы гепатита илилюбой другой возбудитель вируснойинфекции.

6.ОБОРУДОВАНИЕ И РЕАГЕНТЫ

6.1.

Для выполнения анализа по определениюконцентрации глюкозыс применением набора реагентов «ГЛЮКОЗА– UTS»рекомендуется использовать фотометр,фотоэлектроколориметр, полуавтоматическийили автоматический биохимическийанализаторы, позволяющие выполнятьизмерение поглощения оптическойплотности при длине волны 505 (490-550) нм(режим по конечной точке), и обеспечивающиетермостатирование фотометрическойячейки при температуре

+(37±0,5)ОС.

6.2. Общелабораторноеоборудование.

7.АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ

7.1. Негемолизированнаясыворотка или плазма крови.

7.2. Сыворотку илиплазму крови следует отделить отформенных элементов крови немедленнопосле взятия крови.

7.3.Для замедления гликолиза и предотвращениясвертывания при заборе крови использоватьпробирки, содержащие антикоагулянтфторид натрия.

7.4.Образцы сыворотки или плазмы дляпроведения анализа на содержание глюкозыстабильны не более 3-х суток при +(2-8) ОС[3].

8.ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА

8.1. Реагент икалибратор готовы к использованию.

8.2.Проведениеручного анализа с использованиемфотометра или фотоэлектроколориметра.

8.3.Отобрать компоненты реакционной смесис использованием пипеточных дозаторовв объемах, указанных в таблице:

Анализируемая проба, мкл Калибровочная проба, мкл
Реагент 1000 1000 1000
Калибратор 10
H2O 10
Сыворотка или плазма крови 10

8.4.Пробы тщательно перемешать и инкубироватьпри температуре +(37±0,5) ОСв течение 5 минут или при комнатнойтемпературе (+18…+25 ОС)в течение 10 минут.

8.5.Измерить оптическую плотностьанализируемой пробы и калибровочнойпробы против холостой пробы в оптическойкювете при длине волны 505 (490-550) нм. Окраскараствора стабильна в течение 30 минут.

Концентрациюглюкозы в сыворотке крови или плазме(ммоль/л) определить по формуле:

где: С – концентрация глюкозы в анализируемомобразце сыворотки или плазмы в моль/л;

Аобр– оптическая плотность анализируемойпробы отн. холостой пробы, ед. опт. плотн.;

Акал–оптическая плотность калибровочнойпробы отн. холостой пробы, ед. опт. плотн.;

Cкал–концентрация глюкозы в калибраторе,равная 5,55 ммоль/л.

8.6. Если полученнаяконцентрация глюкозы в образце выше25 ммоль/л, то исследование следуетповторить: разбавить анализируемыйобразец 0,9% раствором NaCl в соотношении1:1 и полученный результат определенияумножить на 2.

8.7.Для выполнения измерений наполуавтоматическомили автоматическом биохимическоманализаторах следует:

8.7.1. Установить программу определенияконцентрации глюкозы согласнотаблице:

Наименование параметра Значение
Метод измерения Конечная точка
Длина волны, нм Основная 505 (490-550), дифференциальная 600
Измерение против дист. вода
Температура реакции 37 ОС
Единица измерения ммоль/л
Число знаков после запятой 2
Изменение оптической плотности Увеличивается
Соотношение реагент/проба 100:1
Концентрация калибратора, ммоль/л 5,55
Время реакции, мин 5 (37 ОС)
Верхний предел абсорбции реагента против воды, ед. опт. плот. 0,3
Нижний предел абсорбции реагента против воды, ед. опт. плот. 0
Границы линейности, ммоль/л 0,5-25
Максимум нормы, ммоль/л 5,9
Минимум нормы, ммоль/л 4,1

8.7.2.При первомиспользовании набора, а также приполучении новой серии набора

«ГЛЮКОЗА-UTS»необходимо провести калибровку сиспользованием входящего в составнабора калибратора глюкозы.

8.7.3.Концентрация глюкозы в образцерассчитывается в ммоль/лна основании калибровочной прямой,рассчитаннойавтоматически и сохраненной в памятибиохимического анализатора.

8.7.4.Если полученная концентрация глюкозыв образце выше 25ммоль/л, то исследование следуетповторить: разбавить анализируемыйобразец 0,9% раствором NaCl в соотношении1:1 и полученный результат определенияумножить на 2.

9.УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ЭКСПЛУАТАЦИИ НАБОРА

9.1.Набор реагентов «ГЛЮКОЗА–UTS»должен храниться в упаковкепредприятия-изготовителя при температуре+2..+8 °С в течение всего срока годности.Допускается хранение наборов притемпературе до +25 °С не более 5 суток.Замораживание компонентов набора недопускается.

9.2. Срок годностинабора 18 месяцев с даты изготовления.

9.3.Реагент после вскрытия флакона можетхраниться при температуре +2..+8 °С взащищенном от света месте в течениевсего срока годности в плотно закрытомфлаконе.

9.4.Калибратор после вскрытия флакона можетхраниться при температуре +2..+8 °С взащищенном от света месте в течение 1месяца в плотно закрытом флаконе.

9.5.Для получения надежных результатовнеобходимо строгое соблюдение инструкциипо применению набора.

Список литературы

  1. Kaplan L.A. Glucose. Kaplan A. et al. Clin. Chem. The C.V. Mosby Co. St.Louis. Torоnto, Prinston 1954; 1032-1036.

  2. Trinder P. Ann Clin Biochem, 1989; 624-633.

  3. Tietz N W et al. Clinical Guide to Laboratory Tests, 3rd ed AACC 1995.

  4. Young DS. Effects of disease on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC 2001.

Производится ООО«Эйлитон» по заказу ЗАО «А/О Юнимед».

Повопросам, касающимся качества набора«ГЛЮКОЗА–UTS»следует обращатьсяв ЗАО «А/О ЮНИМЕД» по адресу: 129301, Москва,ул. Касаткина, 3а; Тел. (495)734-91-31, 8-800-333-91-31,

Факс: (495) 564-86-41;

E-mail:office@;

Источник: https://gigabaza.ru/doc/103418.html

Глюкозооксидазный и гексокиназный методы определения глюкозы в сыворотке в крови

Глюкозооксидазный метод

Точная постановка диагноза, назначение лечения требуют проведения ряда лабораторных исследований.

Метод определения глюкозы в сыворотке крови – важнейший инструментарий в выявлении гипер- и гипогликемии у больных сахарным диабетом.

Способ позволяет корректировать медицинскую терапию данных метаболических нарушений. Определить уровень глюкозы диагностическим путем можно также в цельной крови и ее плазме.

Методики определение глюкозы в крови

Методик для определения количества глюкозы в крови разработано много.

Некоторые из них (редуктометрические, колориметрические) практически не применяются из-за высокой токсичности и низкой точности результатов.

Чаще всего используют ферментативные исследования. Глюкозооксидазный способ – метод цветной реакции, происходящей при нагревании углеводов. Гексокиназный определяет активность крови на гексокиназу.

Глюкозооксидазный метод

Глюкозооксидазный метод определения глюкозы в крови основан на ее реакции окисления под воздействием фермента. При этом образуется перекись водорода, она окрашивает вещество хромоген, по концентрации которого определяют количество глюкозы.

Глюкозооксидазный метод применяют при:

  • наследственной непереносимости фруктозы;
  • пентозурии;
  • непереносимости лактулозы.

Недостаток исследования в том, что перекись водорода способна окислять как хромоген, так и присутствующую в крови аскорбиновую, мочевую кислоту, билирубин. Рассчитывают количество глюкозы фотометрическим способом, данные интенсивности окрашивания сопоставляют с калибровочным графиком.

В лабораторных условиях определить уровень вещества можно:

  1. в венозной крови. Используются автоматические анализаторы;
  2. в капиллярной крови. Забор осуществляют из пальца.

Электрохимический способ заключается в использовании электродов с содержанием глюкозооксидазы. Определяется количество образовавшейся перекиси водорода, либо оставшийся уровень кислорода, расходуемого в процессе окисления.

Диагностические полоски применяются в домашних условиях, в их основе лежит глюкозооксидазно‑пероксидазная реакция, в качестве хромогена выступает бензидин.

Гексокиназный способ

Гексокиназный метод основан на биохимической реакции, которая позволяет определить степень активности гексокиназы в сыворотке крови.

Вещество является важнейшим ферментом метаболизма глюкозы, лимитирующим скорость процесса в клетках.

В лабораторных условиях под действием гексокиназы глюкоза фосфорилируется за счет аденозинтрифосфорной кислоты.

В результате реакции образуются органические молекулы, количество которых определяют по уровню светопоглощения в ультрафиолетовой зоне. Слишком быстрая положительная гексокиназная реакция может также являться признаком возникновения злокачественных опухолей.

Подготовка к анализу

Исследования сыворотки крови на глюкозу назначают при:

Перед анализами нужно соблюдать ряд условий, чтобы результаты были максимально достоверными:

  1. исследование проводится натощак. Материал берут в утреннее время;
  2. за пару дней до диагностики нужно избегать тяжелой физической нагрузки, стресса;
  3. в суточном рационе пациента должно присутствовать не менее 150 грамм углеводов. При недостатке будет расти уровень глюкозы, а падает он медленно, что искажает данные анализа;
  4. за сутки до диагностики нельзя курить и пить алкогольные напитки;
  5. нельзя проводить исследование после тяжелых операций, родов, при наличии воспалений. Противопоказан анализ при циррозе печени, обострении болезней желудка, опухолевых процессах;
  6. за пару дней до исследования не следует проходить физиотерапевтические процедуры, принимать оральные контрацептивы, мочегонные препараты, психотропные средства, кофеин.

Состояние натощак определяется как промежуток между приемами пищи не менее восьми часов. Забор крови осуществляют после ночного воздержания от еды.

Анализ может дать ложный положительный результат при гипокалемии и эндокринных болезнях (синдроме Кушинга, тиреотоксикозе).

Нормы глюкозы в сыворотке крови по возрастам

Нормальные показатели зависят от возраста:

  • в пуповинной крови может присутствовать от 2,5 до 5,3 ммоль/л;
  • у недоношенных детей — от 1,1 до 3 ммоль/л;
  • у детей первого дня жизни – от 2,22 до 3,33;
  • в месячном возрасте от 2,7 до 4,4;
  • в детском возрасте старше 6 лет – от 3,3 до 5,5 ммоль/л;
  • у взрослых до 60 лет – от 4,4 до 6,3;
  • у пожилых людей – от 4,6 до 6,1 ммоль/л.

Гипогликемия у взрослых диагностируется при показателях глюкозы меньше 3,3 ммоль/л, а гипергликемия — больше 6,1 ммоль/л

О чем говорит повышение/понижение показателя

Гипергликемия (подъем уровня глюкозы в крови) наблюдается при:

  • нарушении гормональной функции гипофиза, щитовидной железы: тиреотоксикозе, акромегалии, синдроме Кушинга;
  • недугах поджелудочной железы: диабете, панкреатите, муковисцидозе, опухолевых явлениях, гемохроматозе;
  • заболеваниях печени, почек;
  • нарушениях деятельности нервной системы: кровоизлияниях, опухолях, травмах мозга;
  • отравлениях эфиром, синильной кислотой;
  • при менингите, эпилепсии;
  • сердечных недугах: инфаркте миокарда, стенокардии;
  • дефиците витамина В 1;
  • сильных ожогах.

Гипогликемия наблюдается у пациентов с:

  • опухолью панкреатических островков, дефицитом глюкагона;
  • повреждениями печени, которые вызваны отравлением мышьяком, алкогольными напитками, антигистаминными таблетками, фосфорными, ртутными соединениями, бензолом, парацетамолом;
  • недугами печени, когда нарушены гликогенообразование, глюконеогенез;
  • эндокринными нарушениями: аддисоновой болезнью, гипотиреозом;
  • болезнями почек, кишечника, обусловленными нарушением всасывания.

по теме

Об определении глюкозы в сыворотке в крови в видео:

Определение уровня глюкозы необходимо для точной постановки диагноза и коррекции лечения при сахарном диабете. Гексокиназный способ анализа подразумевает определение активности гексокиназы в сыворотке крови. Глюкозооксидазный метод определяет количество вещества в плазме, спинномозговой жидкости.

Делается анализ натощак. Накануне исследования нельзя заниматься сильным физическим трудом, употреблять алкоголь и курить. Суть метода заключается в изучении реакции окисления глюкозы с участием фермента глюкозооксидазы, в ходе которой образуется перекись водорода.

Чаще всего способ применяют в эндокринологических отделениях стационаров. Обследование проводят с помощью автоматического анализатора, фотометра. В экстренной ситуации применяют портативные глюкометры.

Источник: http://diabet24.guru/diagnostika/analizy/na-saxar/metod-opredeleniya-v-syvorotke-krovi.html

Глюкозооксидазный способ определения глюкозы

Глюкозооксидазный метод

Для определения концентрации исключительно глюкозы в различных жидкостях организма человека используют глюкозооксидазный метод. Преимуществом этого теста является его точность.

Диагностика в отличие от экспресс-методов позволяет выявить количество чистой глюкозы, без домеси к ней фруктозы и других сахаров. Принцип этой реакции заключается в окрашивании раствора, которое происходит вследствие взаимодействия окислителей со специфическими красителями.

Оценка результатов исследования проводится с помощью метода колориметрии и сравнения со стандартными растворами.

Когда назначается проведение глюкозооксидазного метода?

Этот тест используют для выявления нарушения толерантности к сахару и развития преддиабета, а также в стадии разгара болезни. Но для таких целей анализ используют редко, это связано с его высокой стоимостью и длительным ожиданием результата. Чаще всего определение глюкозы в крови и моче с помощью этого метода применяют при дифференциальной диагностике таких заболеваний, как:

  • синдром непереносимости лактозы;
  • непереносимость фруктозы;
  • выделение фруктозы с биологическими жидкостями организма;
  • повышенная концентрация пентозы в моче.

Несомненным достоинством глюкозооксидазного теста является его точность.

Что в основе этого способа?

При окислении сахара кислородом происходит выделение перекиси.

Существуют различные методы определения концентрации глюкозы в крови, но глюкозооксидазный является наиболее точным. Подоснова его состоит в том, что при взаимодействии сахара с кислородом воздуха происходит окисление реагента. В раствор выделяется перекись водорода.

Это вещество взаимодействует с ортотолуидином, образуя окрашенное соединение. Для поведения этой реакции необходимо присутствие специальных ферментов. При реакции окисления должна присутствовать глюкозооксидаза, а при окрашивании жидкости — пероксидаза.

Интенсивность окраски раствора будет зависеть от содержания глюкозы и быть более всего интенсивной при высоком ее содержании.

Суть глюкозооксидазного метода определения глюкозы

Оценка результата происходит с помощью количественного метода фотометрии через один и тот же промежуток времени. Обязательно использование калибровочного раствора, который содержит определенную заявленную норму сахара и, отталкиваясь от нее, можно судить о концентрации глюкозы в выделяемых жидкостях организма, чаще в крови.

Как проводится анализ?

Забор материала от больного осуществляется натощак. Для проведения теста используют венозную кровь в количестве 5 мл. Накануне диагностики больному показана строгая диета.

Это позволит судить о достоверности результата и исключить возможные погрешности анализа. За 2 дня перед изъятием крови пациент должен отказаться от вредных привычек употребления алкоголя и курения.

Также необходимо ограничить прием чрезмерно сладких блюд и по возможности избегать стрессовых ситуаций.

Для получения плазмы с сахаром проводится центрифугирование крови.

Чаще всего этот метод определения концентрации глюкозы выполняют способом центрифугирования, которым выделяют форменные элементы. Количество сахара определяют уже в плазме. При добавлении к ней всех необходимых реагентов окраска наблюдается через 20 минут, если тест проводится при комнатной температуре. Расчет уровня глюкозы проводится по калибровочному графику или с помощью правила порций.

Реактивы для исследования

Для определения сахара наиболее удобно использовать экспресс-методы определения глюкозы в крови. Это объясняется простотой в использовании и быстрым получением результата.

Кроме этого, больному не нужно идти в лабораторию или больницу. Но в отличие от глюкозооксидазного теста такая диагностика является недостоверной.

Так как не дифференцирует глюкозу от других сахаров и определяет их концентрацию вместе.

Основу глюкозооксидазной реакции составляет натрия хлорид 9% раствор и цинка сульфат 50%. Их добавляют на стадии центрифугирования крови. Кроме этого, используют буферный раствор с уксусной кислотой и ацетатом натрия.

Методом титрования определяют его рН на уровне 4,8.

После, добавляется глюкозооксидаза, из-за чего выделяется перекись водорода и пероксидаза, участвующая в окрашивании раствора до нужной концентрации для получения точного результата.

Нормы при проведении анализа

Измерение количества сахара происходит в специальных единицах — миллимолях на литр раствора.

Глюкозооксидазное исследование крови проходят обязательно на пустой желудок и используют для этого плазму или сыворотку. Норма количества ее для взрослых как для женщин, так и для мужчин составляет 3,3—5,5. Для детей до 15-ти лет этот показатель немного ниже и колеблется в пределах 3,2—5,3.

У новорожденных глюкоза крови составляет 1,7—4,2. Увеличение показателей наблюдается при развитии у больного сахарного диабета или при нарушении толерантности к глюкозе.

Это состояние является преддиабетом, и если его вовремя не лечить, то в скором времени оно приведет к развитию этой тяжелой патологии.

Источник: http://EtoDiabet.ru/diab/obsledovaniya/glyukozooksidaznyj-metod.html

Мое Здоровье
Добавить комментарий